随着冬季的到来，季节性流感、肺炎等呼吸道疾病的发病率显著上升，各地医院就诊人数激增。因此，提供快速准确的诊断方法和有效的治疗方案变得尤为重要。在众多检测技术中，一步RT-qPCR法（即一管式RNA全预混试剂）因其高效、便捷、敏感等特性而受到广泛青睐。

在一步法中，基因特异性引物首先与待检测靶标结合，并在逆转录酶的催化下合成第一链cDNA。然而，在实际应用中，错误的模板-引物匹配可能导致非特异性cDNA的产生，这将导致非特异性扩增，消耗反应组分，限制后续主反应的进行。当靶核酸浓度较低时，此类竞争作用会显著降低扩增性能，表现为扩增曲线形态差、荧光增量低及Ct值偏高等，从而显著降低检测试剂的灵敏度和特异性。

此外，由于一管式RNA全预混试剂将酶、引物探针及反应液预混于一管，长期保存会造成酶活力下降或失活，影响检测试剂的性能。逆转录酶作为关键成分，其性能直接关系到一步法核酸检测试剂的准确性和灵敏度，因此，提高逆转录酶的特异性和稳定性对一管式RNA全预混试剂的开发至关重要。

为此，PG电子推出了一款新型温启动逆转录酶，该酶在低温下其活性被封闭，而在工作温度下则能够激活，从而避免低温下引物-模板错误匹配的问题，提高检测特异性和灵敏度。这款逆转录酶利用适配体方法进行热启动修饰，经过大量优化和筛选，从而选取了高亲和力的适配体，并与逆转录酶进行共同孵育，以确定最优的封闭和激活效果。

经过多次筛选和工艺优化，PG电子开发的温启动逆转录酶在42℃下可实现99%的酶活封闭，其封闭效果优于市场同类产品，确保反应液能够长期稳定高效地获得逆转录产物，解决了全预混试剂存储稳定性的问题。同时，该产品在工作温度55℃时可释放95%以上的酶活，从而保证试剂的扩增灵敏度。经过适配体修饰的PG电子温启动逆转录酶在非工作温度下的酶活性极低，显著降低了非特异性扩增的风险，而在工作温度下则能完全释放活性，对扩增性能无影响。

借助温启动的特性，PG电子的温启动逆转录酶可在低浓度模板情况下，仍然实现特异性靶标的扩增，且扩增平台期与高拷贝数模板保持一致。与同类产品A相比，PG电子的整套温启动逆转录酶在三个不同系统中均表现优异，有效提升了Ct值出峰时间和检出率，展现了更高的检测性能。

该逆转录酶经改造后的合成速率显著提高，能够在PCR程序一致的条件下，2分钟内实现与15分钟逆转录同样的灵敏度。此外，在多个RNA项目中进行37℃加压7天的稳定性检测中，PG电子的温启动逆转录酶表现出色，其性能未受影响，而竞品A在相同条件下的扩增性能却显著下降，灵敏度滞后超过2个Ct。

在应用案例中，PG电子的温启动逆转录酶帮助客户优化了不同问题，尤其在RNA全预混稳定性方面的表现尤为突出。与同类产品相比，PG电子的逆转录酶可在更高温度下封闭酶活，其封闭效率高且稳定性强，避免了引物探针等关键成分的降解，在确保高灵敏度和兼容快速程序的基础上，提升了全预混试剂的稳健性。

在针对RNA全预混试剂的应用测试中，将PG电子的温启动逆转录酶与同类竞品A进行对照，结果显示，在37℃加压处理10天后，使用PG电子逆转录酶的全预混试剂与新配制的对照组无显著差异，而使用竞品A的全预混试剂则在压力处理后表现出明显的扩增效率降低（Ct值推后，荧光平台期下降）。