PG电子为您解析细胞系与细胞株的相关概念及建立要求，帮助您更好地了解生物医疗领域的基本知识。

一、基本概念

1. 细胞系（Cell Line）：当原代培养经过首次传代成功后，即形成细胞系，细胞系由原代培养物中的细胞世系构成。

2. 细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的，具有特定性质或标志物的细胞称为细胞株。细胞株的特殊性质必须在整个培养过程保持一致。如果细胞无法持续传代或传代次数有限，则称为有限细胞株（finite cell strain）；若能够连续传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，当其在体外培养超过六个月，且生长稳定并可持续传代，则可称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

什么样的体外培养细胞可被认可为已鉴定的细胞，具体情况不同且无统一规定。原代培养的细胞只需确保供体均一，取材部位及组织种类稳定。尤其是用于长期培养或反复传代的细胞，需注意以下几点：

1. 组织来源：需明确细胞供体所属物种，是否来自人体或动物；个体性别、年龄；取材的器官或组织，特别是对于肿瘤组织，需提供临床与病理诊断信息以及病历号等。

2. 细胞生物学检测：了解细胞的基本与特殊生物学特性，包括一般形态、特异结构、细胞生长曲线、分裂指数、倍增时间及接种率等。对于肿瘤细胞，需进行软琼脂培养、异体接种致瘤及对正常组织的侵润力等实验，以说明其来源及恶性特征。

3. 培养条件和方法：说明细胞系（或株）适应的生存环境，包括使用的培养基、血清种类、用量及适宜的pH值。

三、细胞建立的要点及基本过程

(一) 肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：主要材料来源于外科手术或活检的肿瘤组织，取材时应避免使用坏死组织，应选择肿瘤细胞活力较好的部位。例如，肿瘤转移淋巴结或胸腹水是较理想的培养材料。取材后应尽快进行培养，若无法立即培养，可考虑冷冻保存，具体方法同正常组织。

2. 成纤维细胞除去：肿瘤组织中常混杂成纤维细胞，这可能导致其与癌细胞竞争生长，因此需仔细排除，常用方法包括机械刮除、反复贴壁、消化排除和胶原酶消化等。

3. 提高肿瘤细胞存活与生长率：由于肿瘤细胞在体外培养较为困难，建立可传代的肿瘤细胞系更具挑战性。肿瘤细胞在原代培养后需适应新的环境，因此需采用特定的培养措施，例如使用适宜的底物（如鼠尾胶原）和细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等），也可以考虑动物媒介培养。

(二) 人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，并添加2ml RPMI 1640培养基。

2. 混合后沿管壁缓慢加入4ml淋巴细胞分离液，静置30分钟。

3. 在1500rpm下离心15分钟，吸取白血球层（第二层）至另一个离心管中。

4. 使用5ml RPMI 1640洗涤白细胞两次。

5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640和加入10μl环胞霉素及100μl EBV液，混合均匀。

6. 水浴摇床以每分钟40次，37℃下培养3小时。

7. 以1500rpm离心15分钟，将细胞接种至含有1ml培养基（含1mM/ml谷氨酰胺）的培养瓶中，并加入10μl环胞霉素，轻轻混合，然后在37℃下培养。

8. 5天后观察细胞转化及生长情况，决定是否进行半量换液，一般需进行1-2次换液，并维持环胞霉素浓度。

9. 待转化细胞数量明显增加并出现细胞团块后，可转入25ml培养瓶中，加入1-2ml培养基，在37℃下培养10-15天，每隔3-4天观察一次，决定是否换液或传代。

10. 当细胞生长数量达到一定水平后，可进行冻存，冻存前应进行核型分析和存档。

通过以上过程，您可以在细胞培养和建株中获得更好的效果，助力生物医疗行业的研究与应用，PG电子将继续为您提供更详尽的信息与支持。