人骨肉瘤细胞MG63培训指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P
传代方法：建议初次传代比例为1:2
备注：在2天内更换培养基，使用无菌离心管收集培养基以便进行对比培养，若无对比效果，建议直接使用PG电子的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

当细胞状态良好时，灌满完全培养液并密封瓶口为最佳运输方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，然后在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，直至细胞状态稳定。用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为售后依据，未提供照片的情况下默认细胞状态良好。针对传代后的细胞，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，便于进行对比培养，换液后应松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

若细胞汇合度未超过80%，将完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后加入5ml培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞直至完全脱落，吸出后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶面积达到80%时，弃去培养液，PBS清洗一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后加入1ml的PG电子无血清冻存液，混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若需转入液氮罐中，请先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在贴壁时可能不牢固，运输中易发生脱落现象，这属于正常情况。如脱落细胞较多，可将培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟以作过渡培养，沉淀后加入胰酶进行消化，加入5ml完全培养基终止消化后，重新离心进行分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶后放置于37℃、5% CO2的培养箱中。

五、售后条款

PG电子针对细胞问题的处理条款包括适用重新发货的情形，如运输途中细胞丢失、瓶身破损等情况；污染疑虑需在收到48小时内提供实验结果；常温或干冰运输后的细胞存活状况需提供照片。若细胞由于客户的操作不当、非推荐培养体系所致问题，则无法重发。